Producción de plantas transgénicas de Solanum phureja variedad yema de huevo clon 1 mediada por Agrobacteriun tumefaciens
Keywords:
S. Phureja, Transfección Gen, Inhibidor Proteasa (es)Downloads
variedad Yema de Huevo Clon 1 que sean potencialmente tolerantes a insectos, rasgo conferido por la inserción
en su genoma del gen mirl2 derivado del pomelo (Citrus paradisi) que codifica para un inhibidor de proteasas de
tipo Serina. Se trabajó con el sistema de transformación mediado por Agrobacterium tumefaciens utilizando la cepa
LBA4404 que contiene el plásmido residente pAL4404 y el vector binario pNOV022 el cual contiene el gen de interés mirl2. Se utilizaron como explantes entrenudos con una longitud de 0,5 a 1 cm provenientes de material in
vitro entre cuatro a cinco semanas de edad, los cuales fueron co-cultivados en una concentración bacteriana de
1/50, para posteriormente ser colocados en medio de regeneración sin agente de selección. Se encontró que el
medio de regeneración más apropiado esta compuesto por Zeatina Ribósido (ZR 2 mg/L), ácido naftalenacético
(ANA 0,04 mg/L) y ácido giberélico (AG3 0,1 mg/L) en el cual se logró obtener un 87,6% de callogénesis y un
48,6% de regeneración. Posteriormente se estableció una población de individuos potencialmente transgénicos,
a partir de los cuales se realizó una extracción de DNA, organizando los extractos en pools de diez individuos,
obteniéndose un total de 52 pools, a partir de 520 individuos. Se utilizaron cuatro diferentes cantidades de DNA para un volumen final de 50 μl en la PCR: 150 ng; 300 ng; 600 ng; 1.200 ng y se realizó PCR para los dos genes mirl2 (IP) y manA (PMI). Tras el análisis por electrofóresis de los resultados de la PCR para cada uno de los pools no se observó la señal de amplificación específica de los genes de interés, en tanto que se observó la señal para los genes endógenos de control. Finalmente se analizaron 62 clones provenientes de un segundo ensayo de transformación, los cuales fueron analizados individualmente. Se trabajó con una cantidad de DNA de 600 ng y se realizó PCR para los dos genes mirl2 (IP) y manA (PMI), siguiendo las mismas condiciones de trabajo. En esta segunda población de regenerantes no se observó la amplificación específica para los genes de interés, sin
embargo se observó la señal para los genes endógenos de control.
How to Cite
APA
ACM
ACS
ABNT
Chicago
Harvard
IEEE
MLA
Turabian
Vancouver
Download Citation
Article abstract page views
Downloads
License
Copyright (c) 2006 Acta Biológica Colombiana
This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
The acceptance of manuscripts by the Journal implies its electronic edition of open Access under Creative Commons Attribution License 4.0, and the inclusion and diffusion of the complete text through the institutional repository of the Universidad Nacional de Colombia and in all the specialized data bases that the editor considers adequate for its indexation to increase Journal visibility.
Acta Biológica Colombiana allows authors to archive, download and distribute the final published version, as well as pre-print and post-print versions including a header with the bibliographic reference of published article. The journal encourages the authors to distribute the final versión through Internet, for example in their personal or institutional web pages, and scientific social networks.