Identificación del virus del mosaico suave del ñame (YMMV) en muestras colombianas de Dioscórea alata Caracterización biológica, serológica y molecular

Identification of the yam mild mosaic virus (YMMV) in Colombian samples of Dioscorea alata. -Biological, serological and molecular approaches-

El virus del mosaico del ñame (YMV) y el virus del mosaico suave del ñame (YMMV) son patógenos que afectan el ñame (Dioscórea spp.). Enmarcado en un programa de fitosanidad, el presente trabajo reporta los resultados de un estudio biológico, serológico y molecular para el diagnóstico de potyvirus en muestras de campo y microcultivos. Con la técnica ELISA DAS Indirecto se detectó potyvirus en el 70% (175/250) en muestras de hojas, tubérculo, o microcultivos. Veinte malezas asociadas al cultivo de ñame fueron serológicamente positivas. En campo, las plantas expresaron síntomas de moteado con diferentes grados de clorosis y algunos casos de encrespamiento del borde de la hoja. Con la técnica de inmunosorbent electrón microscopy (ISEM), se identificó, en un extracto, un virus flexuoso de un tamaño estimado en 740 nm x 12 nm, que está dentro de los límites de potyvirus. Por Western Blot se determinó la proteína de la cápside (PC) con pesos de 26 Kd, 28 Kd y 31 Kd en diferentes aislados. Por RT-PCR y de IC-RT-PCR se amplificó el YMMV con primers específicos. Se obtuvo un fragmento de 250pb tanto a partir de hoja como de tubérculo, y además en tubérculos de dos generaciones obtenidas a partir de la planta Ñ22 (P, F1,F2). En una muestra se detectó el YMV. Los resultados demuestran la presencia de YMMV, YMV y mezcla de potyvirus en los aislados analizados. Este es el primer informe sobre la presencia deYMMVen Colombia y de su identificación con la técnica de IC-RT-PCR. Es el primer informe sobre potyvirus en malezas asociadas al ñame y se propone estas plantas como reservorios virales que incrementan el riesgo de infección de cultivos susceptibles circundantes. Los resultados fortalecerán los programas fitosanitarios del cultivo de ñame.

The yam mosaic virus (YMV) and the yam mild mosaic virus (YMMV) are pathogens affecting the yam (Dioscorea sp.). This work presents the results of a serological and molecular study for the diagnosis of potyvirus in field samples and micro cultures, within the framework of a phytosanitary programme. Potyvirus was detected in 70% (175/250) of leaf, tuber, or micro culture samples using the ELISA DAS indirect technique. Twenty weeds associated with yam growing were serologically positive. In the field, plants expressed mottling symptoms with different degrees of chlorosis and some cases of wrinkling at the edges of the leaf. A flexuous virus, having a size estimated as being 740nm x 12 nm, was identified in an extract which was within the limits for potyvirus using the immunosorbent electron microscopy (ISEM) technique. The coat protein (CP) was determined as having 26Kd, 28Kd and 31Kd weight in different isolates by Western Blott. YMMV was amplified by RT-PCR and IC-RT-PCR using specific primers. A 250pb fragment was obtained from leaves as well as tubers and also from tubers from two generations obtained from the Ñ22 (P, F1, F2) plant. YMV was detected in one sample. Results show the presence of YMMV, YMV and a mixture of potyvirus in those isolates analysed. This is the first report concerning the presence ofYMMVin Colombia and its identification by the IC-RT-PCR technique. This is the first report concerning potyvirus in weeds associated with yam, identifying such plants as being viral reservoirs and thus increasing the risk of infecting neighbouring susceptible crops. The results strengthen yam crop phytosanitary programmes.