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Evaluación del potencial biotecnológico de un promotor derivado del virus de la distorsión de la hoja de maracuyá (PLDV), un begomovirus que infecta maracuyá
Evaluation of the biotechnological potential of a promoter derived from passion fruit leaf distortion virus (PLDV), a begomovirus that infects passionfruit
DOI:
https://doi.org/10.15446/rev.colomb.biote.v21n1.77636Palabras clave:
Biobalística, expresión transitoria, gen uidA, mesófilo (es)Biobalistic, mesophyll, transient expression, uidAgene (en)
Los avances biotecnológicos en plantas requieren la bioprospección de nuevos promotores para la expresión de genes de interésagronómico, en particular, es necesario caracterizar nuevos promotores con expresión tejido específica. El objetivo de esta investi-gación fue evaluar la actividad de expresión del promotor del gen AV1que codifica para la proteína de la cápside (CP) del virus de la distorsión de la hoja de maracuyá (Passion fruit leaf distortion virus,PLDV) mediante ensayos transitorios de biobalística de baja presión. Se realizó un análisis de la región promotora del gen AV1empleando herramientas bioinformáticas. Se construyó una fu-sión traduccional (CP-PLDV-GUS), que porta la región promotora del gen AV1de PLDV fusionada al gen reportero uidA(GUS). CP-PLDV-GUS fue bombardeado sobre hojas de plántulas de tabaco cultivadas in vitro empleando una pistola de genes. Como control positivo se utilizó el plásmido pBI121 que porta el gen GUS bajo el control del promotor 35S de CaMV. Se llevaron a cabo 11 re-peticiones, donde la unidad experimental fue la hoja y la variable de respuesta, la expresión transitoria del gen GUS representado por el número de puntos azules observados en las hojas bombardeadas. Como resultado, el análisis estadístico no paramétrico demostró que existe evidencia muestral suficiente para confirmar que, tanto el promotor AV1del PLDV y 35S de CaMV presentan una actividad de expresión semejante. Finalmente, el promotor del gen AV1de PLDV mostró una fuerte actividad de expresión del gen reportero en las células del mesófilo de las hojas, el cual podría ser usado para conferir expresión tejido específica enplantas transgénicas
Biotechnological advances in plants require the bioprospecting of new promoters for the gene ́s expression of agronomic interest,in particular, it is necessary to characterize new promoters with tissue-specific expression The objective of this research was to eval-uatetheexpressionactivityoftheAV1genepromoterthatcodesforthecapsidprotein(CP)ofthePassion fruit leaf distortion virus(PLDV) by means of transient tests of low pressure biobalistics. An analysis of the promoter region was carried out using bioinfor-matics tools. A CP-PLDV-GUS translational fusion was constructed, which carries the promoter region of the AV1gene of PLDV fused to the uidAreporter gene (GUS). CP-PLDV-GUS was bombarded on leaves of tobacco seedlings grown in vitro using a gene gun. As a positive control pBI121 carrying the GUS gene under the control of the 35S promoter of CaMV was used. It was carried out 11 repetitions where the experimental unit was the leaf and the response variable the transient expression of the GUS gene represented by number of blue dots observed in the bombarded leaves. As a result, the non-parametric statistical analysis showed that there is sufficient sample evidence to confirm that both the AV1promoter of PLDV and 35S of CaMV exhibit similar expression activity. Finally, the promoter of the AV1gene of PLDV showed a strong activity of expression of the reporter gene in the leaf meso-phyll cells, which could be used to confer tissue-specific expression in transgenic plants.
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