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Analysis of the protein profile of the venoms of snakes Bothrops asper, Bothrocophias myersi and Crotalus durissus from the Colombian Andean Region obtained by RP-HPLC
Análisis del perfil proteico de los venenos de Bothrops asper, Bothrocophias myersi y Crotalus durissus serpientes de la Región Andina en Colombia obtenidos por RP-HPLC
DOI:
https://doi.org/10.15446/rev.colomb.biote.v23n1.94211Palabras clave:
Bothrops asper; Bothrocophias myersi; Crotalus durissus; Venom; Colombia; RP-HPLC (en)Descargas
Snake venoms comprise a highly complex mixture of proteins, and there is also a high interspecific and intraspecific variability in their composition, even in the same region. Our aim was to compare the composition of the venoms of Bothrocophias myersi, Crotalus durissus and Bothrops asper, snakes from the Andean region in Colombia by Reverse-Phase High-Performance Liquid Chromatography (RP-HPLC). The venoms were given to the research group under an agreement with the Fundación Zoológica de Cali. The venoms pool was obtained by manual extraction, lyophilized and refrigerated. The protein found in the venoms was quantified by spectrophotometry using the Bradford and Lowry methods and direct measurement by Nanodrop®. The protein composition was stablished by RP-HPLC, using a Lichosper 100 RP, C18 column (250X4 mm) with a pore size of 5µm, as well as by Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis (SDS-PAGE). The highest quantity of protein was found in the venom of B. myersi (108,6 mg/mL) followed by C. durissus (78,1 mg/mL) and B. asper (74.1 mg/mL). All venoms showed bands of 15 and 50 KDa by SDS-PAGE; The most important finding is the abundance of PLA2 and svMP in the venom of B. myersi. Chromatographic analyses revealed a very similar venom composition profile, but also certain differences in toxins abundance. We conclude that the process of separating the venom proteins by RP-HPLC and SDS-PAGE are very important as a first step to know the venoms profiles, which in turn could allow medical staff to elucidate the clinical syndrome produced by snakebites.
Los venenos de las serpientes comprenden una mezcla compleja de proteínas, y existe una alta variabilidad interespecífica e intraespecífica en su composición, incluso en la misma región. Nuestro objetivo fue comparar la composición de los venenos de Bothrocophias myersi, Crotalus durissus y Bothrops asper de la región andina de Colombia, mediante cromatografía líquida de alta eficiencia en fase reversa (RP-HPLC). Los venenos fueron entregados al grupo de investigación mediante un convenio con la Fundación Zoológica de Cali. El pool de venenos fue obtenido por extracción manual, liofilizado y congelado. La proteína de los venenos fue cuantificada por Absorbancia 280nm por medición directa con Nanodrop®. La composición proteica se estableció por RP-HPLC, utilizando una columna Lichosper 100 RP, C18 (250X4 mm) con un tamaño de poro de 5µm, así como por electroforesis en gel dodecil sulfato de sodio-poliacrilamida (SDS-PAGE). La mayor cantidad de proteínas se encontró en el veneno de B. myersi (108.6 mg/mL), seguido de C. durissus (78.1 mg/mL) y B. asper (74.1 mg/mL). Todos los venenos mostraron bandas de 15 y 50 KDa por SDS-PAGE. El cromatograma de B. myersi exhibió 16 picos por RP-HPLC. Concluimos que la composición de los tres venenos es bastante similar, siendo la fosfolipasa A2 la proteína común en estos y junto con las metaloproteinasas fueron las familias de proteínas más abundantes en el veneno de B. myersi. Las técnicas de SDS-PAGE y el RP-HPLC permiten un primer acercamiento al perfil de los venenos, lo que a su vez podría contribuir a esclarecer el síndrome clínico producido.
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CrossRef Cited-by
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