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Métodos de conservación para actinobacterias con actividad solubilizadora de fósforo
Preservation methods for actinobacterias with phosphate solubilizing activity
Palabras clave:
Viability, cryoprotectants, bank, dry-freezing, cryopreservation (en)
El objetivo de esta investigación fue evaluar diferentes métodos de conservación para actinobacterias solubilizadoras de fósforo debido a la poca información de métodos específicos reportados para estos microorganismos. Los métodos de conservación se evaluaron a 3 diferentes periodos de tiempo; largo, mediano y corto plazo, usando métodos de congelación y liofilización; arcilla, sílica, arena y transferencia periódica, respectivamente. Para ello se usaron 15 aislamientos de 3 localidades diferentes (La Vega, Maní y Tota) y un banco de referencia de la Unidad de Investigaciones Agropecuarias de la Pontificia Universidad Javeriana. Se prepararon todos los inóculos en solución salina al 0,85% (p/v) y se ajustaron a una concentración de 108 cel/mL, seguido a ello se inocularon los viales de cada método de conservación con sus respectivos crioprotectantes, glicerol 20% (v/v), 30% (v/v) para congelación y skim milk 18% (p/v) para liofilización. Los métodos a mediano plazo se ejecutaron de igual manera, el inóculo se agregó a 10 perlas de arcilla, 10 g de arena y 5 g de sílica, posteriormente se almacenaron a 4ºC. El método de corto plazo se evaluó en agar avena (15 g/L). La evaluación se realizó mediante recuento directo en cámara de Neubauer por la técnica de azul de tripán, además de la caracterización macroscópica y microscópica de cada aislamiento en transferencia periódica. Se estableció que la actividad solubilizadora de fósforo se mantuvo más estable en los métodos de glicerol 30 % (p/v) y liofilización según el análisis estadístico.
Palabras clave: viabilidad, crioprotectantes, banco, liofilización, crioconservación.The aim of this research was to evaluate different methods of preservation for actinobacteria with phosphate solubilization activity due to there are a few specific methods reported for these organisms. The methods were evaluated at three different time periods; long, medium and short-term and employing methods as cryopreservation and dry-freezing; clay, silica and sand; and periodically plating, respectively. Therefore 15 isolates from 3 different locations (La Vega, Maní and Tota) and a bank reference from Livestock Research Unit of the Pontificia Universidad Javeriana were used. All inocula were prepared in 0.85% saline solution (w/v) which were adjusted to a concentration of 108 cells/mL, followed each vial was inoculated with their respective storage cryoprotectants , glycerol 20% (v/v), 30% (v/v) to freeze and 18% skim milk (w/v) for dry-freezing. Medium-term methods were performed similarly; the inoculum was added to 10 clay beads, 10 g of sand and 5 g of silica and then stored at 4 °C. The short-term method was evaluated in oatmeal agar (15 g/L). The evaluation was performed by direct counting in a Neubauer chamberusing trypan blue staining technique, in addition to macroscopic and microscopic characterization of each isolate in periodic plating. It was established that the phosphorus solubilizing activity was more stable in glycerol 30% (w/v) and lyophilization for statistical analysis.
Keywords: Viability; cryoprotectants; bank; dry-freezing; cryopreservation.
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Álvarez, G. S., Pieckenstain, F. L., Desimone, M. F., Estrella, M. J., Ruiz, O. A., & Díaz, L. E. (2010). Evaluation of Sol-Gel Silica Matrices as Inoculant Carriers for Mesorhizobium Spp. Cells. Current Research, Technology and Education Topics in Applied Microbiology and Microbial Biotechnology, ed. A. Mendez-Vilas, Formatex.
Birch, A., Häusler, A., & Hütter, R. (1990). Genome Rearrangement and Genetic Instability in Streptomyces spp. Journal of Bacteriology, 172(8), 4138-4142
Bozoǧlu, T., Özilgen, M., & Bakir, U. (1987). Survival kinetics of lactic acid starter cultures during and after freeze drying. Enzyme and Microbial Technology, 9(9), 531-537.
Burget, N., Sierra, N., & Brito, L. C. (2012). Conservación de cepas microbianas por el método de liofilización para el control microbiológico en Laboratorios Liorad. Revista CENIC Ciencias Biológicas, 43(3), 1-4.
Cardona, G. I., Arcos, A., & Murcia, U. (2005). Abundancia de actinomicetes y micorrizas arbusculares en paisajes fragmentados de la amazonia colombiana. Agronomía Colombiana, 23(2), 317-326.
Chen, H., Lin, C., & Chen, M. (2006). The effects of freeze drying and rehydration on survival of microorganisms in kefir. Asian Australasian Journal of Animal Sciences, 19(1), 126.
Filippova, S. N., Surgucheva, N. A. & Gal´chencko, V. F. (2012). Long-Term storage of collection cultures of Actinobacteria. Microbiology, 81(5), 630-637.
Franco, M., & Chavarro V. (2016). Actinobacteria as Plant Growth-Promoting Rhizobacteria. Recuperado de http://www.intechopen.com/books/actinobacteria-basics-and-biotechnological-applications/actinobacteria-as-plant-growth-promoting-rhizobacteria.
Franco, M. (2008). Evaluación de caracteres PGPR en actinomicetos e interacciones de estas rizobacterias con hongos formadores de micorrizas, Editorial de la Universidad de Granada.
Freire, J., & Sato, M. (1999). Conservación de cultivos de rizobios. Revista Latinoamericana De Microbiologia-México, 41(1), 35-42.
García, M., & Uruburu, F. (2001). La conservación de cepas microbianas Colección microbiana de cultivos tipo (CECT) Universidad de Valencia, España. Temas de la actualidad. Recuperado de http://www.semicrobiologia.org/pdf/actualidad/SEM30_12.pdf
Glyan, H. & Gary, H. (1999). Ingenieria ambiental. 2ª edición. In Prentice Hall (Ed.), (pp. 271-273).
Grivell, A., & Jackson, J. (1969). Microbial culture preservation with silica gel. Microbiology, 58(3), 423-425.
Hodgson, J. (1987). Muestreo y descripción de suelos. Barcelona, España: Reverté.
Hubálek, Z. (2003). Protectants used in the cryopreservation of microorganisms. Cryobiology, 46(3), 205-229.
Huertas, S. L. P., Casas, M. M. P., Morales, M. B., Moreno, Z. S., & Castaño, D. M. (2006). Implementación y evaluación de dos métodos de conservación y generación de la base de datos del banco de cepas y genes del Instituto de Biotecnología de la Universidad Nacional de Colombia (IBUN). Nova, 4(5), 39-49.
Leblond, P., Demuyter, P., Simonet, J.M., & Decaris, B. (1990). Genetic instability and hypervariability in Streptomyces ambofaciens: towards an understanding of a mechanism of genome plasticity. Molecular Microbiology, 4(5), 707-714. Doi: 10.1111/j.1365-2958.1990.tb00641.x.
Murphy, J., & Riley, J. (1962). A modified single solution method for the determination of phosphate in natural waters. Analytica Chimica Acta, 27, 31-36.
Nakasone, K. K., Peterson, S. W., & Jong, S. (2004). Preservation and distribution of fungal cultures.
Parra, S. L., Pérez, M. M., Bernal, M., Suárez, Z., & Montoya, D. (2006). Implementación y evaluación de dos métodos de conservación y generación de la base de datos del banco de cepas y genes del Instituto de Biotecnología de la Universidad Nacional de Colombia (IBUN). Nova – Publicación científica, 4(5), 39-49.
Perkins, D. D. (1962). Preservation of Neurospora stock cultures with anhydrous silica gel. Canadian Journal of Microbiology, 8(4), 591-594.
Perry, S. F. (1998). Freeze-drying and cryopreservation of bacteria. Molecular Biotechnology, 9(1), 59-64.
Prada, L. D., Prieto, G. C., & Franco, M. (2014). Screening phosphate solubilizing actinobacteria isolated from the rhizosphere of wild plants from the eastern cordillera of the colombian andes. African Journal of Microbiology Research, 8(8), 734-742.
Prakash, O., Nimonkar, Y., & Shouche, Y. S. (2013). Practice and prospects of microbial preservation. FEMS Microbiol Lett, 339(1), 1-9.
Prieto, G. C., Prada, L. D., Cuervo, C., & Franco, M. (2015). Evaluación de la producción de ácidos orgánicos por Streptomyces spp. y solubilización de tres fuentes de fósforo por la cepa T3A. Revista Colombiana de Biotecnología, 17(1), 111-121.
Rifaat, H. M. (2009). Viability study of some locally isolated Streptomycetes. Journal of Culture Collections, 6(1), 38-41.
Sidyakina, T. M., & Golimbet, V. E. (1991). Viability and genetic stability of the bacterium Escherichia coli HB101 with the recombinant plasmid during preservation by various methods. Cryobiology, 28(3), 251-254.
Trollope, D. R. (1975). The preservation of bacteria and fungi on anhydrous silica gel: an assessment of survival over four years. Journal of Applied Bacteriology, 38(2), 115-120.
Ventura, M., Canchaya, C., Tauch, A., Chandra, G., Fitzgerald, G. F., Chater, K. F., & van Sinderen, D. (2007). Microbiology and Molecular Biology Reviews, 71(3), 495-548.
Yocheva, L., Najdenova, M., Doncheva, D., & Antonova-Nikolova, S. (2002). Influence of the long-term preservation on some biological features of three streptomycetes strains, producers of antibiotic substances. Journal of Culture Collections, 3, 25-32.
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