Calificación de un sistema de HPLC-IR para la cuantificación de carbohidratos de diversas composiciones

Qualification of an HPLC-IR system for the quantification of carbohydrates of various compositions

Introducción: los carbohidratos son las biomoléculas más abundantes en la naturaleza. Su importancia va desde aspectos nutricionales hasta aplicaciones industriales. Entre la inmensa variedad de carbohidratos se encuentran los fructooligosacáridos considerados prebióticos; los azúcares invertidos, de importancia industrial por su alto poder edulcorante; las dextranas, con diversas aplicaciones, pero cuya presencia en jugos de caña provoca afectaciones en la producción azucarera. Las investigaciones y aplicaciones relacionadas con carbohidratos requieren la obtención de datos fiables sobre las cinéticas de síntesis y degradación de los mismos. Uno de los métodos de cuantificación de los carbohidratos es mediante un equipo de cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) acoplado a un detector de índice de refracción (IR). Objetivo: calificar un equipo de HPLC acoplado a un detector de índice de refracción (IR) para la validación del método de cuantificación de carbohidratos. Metodología: la calificación del HPLC-IR se realizó según la Guía para la calificación del equipamiento - Anexo 1 de 2011. Se evaluó la exactitud del flujo de la bomba, la precisión y linealidad del inyector manual, la exactitud y estabilidad de la temperatura del horno, así como la linealidad y relación señal/ruido en el detector IR. Resultados: este trabajo demostró que el sistema HPLC-IR se desempeña de manera consistente de acuerdo con las especificaciones del fabricante, de esta forma se aseguró el rendimiento correcto del equipo en condiciones reales de funcionamiento. Conclusión: la calificación satisfactoria del instrumento analítico permitió la validación del método de cuantificación de carbohidratos mediante esta tecnología.

Introduction: Carbohydrates are the most abundant biomolecules in nature. Its importance goes from nutritional aspects to industrial applications. Among the immense variety of carbohydrates are the fructooligosaccharides considered prebiotics; inverted sugars, of industrial importance due to their high sweetening power; dextrans, with various applications, but whose presence in cane juice affects sugar production. Research and applications related to carbohydrates require obtaining reliable data on their synthesis and degradation kinetics. One of the carbohydrate quantification methods is by means of a high-performance liquid chromatography (HPLC) equipment coupled to a refractive index (IR) detector. Objective: To qualify a HPLC equipment coupled to a refractive index (IR) detector to validate the carbohydrate quantification method. Methodology:The qualification of the HPLC-IR was carried out according to the Guide for the Qualification of the Equipment - Annex 1 of 2011. The accuracy of the flow of the pump, the precision and linearity of the manual injector, the accuracy and stability of the temperature of the oven, as well as the linearity and signal/noise ratio in the IR detector were determined. Results: This work showed that the HPLC-IR system performs consistently according to the manufacturer’s specifications, thus ensuring the correct performance of the equipment under real operating conditions. Conclusion: The satisfactory qualification of the analytical instrument allowed the validation of the carbohydrate quantification method using this technology.

Introdução: os carboidratos são as biomoléculas mais abundantes na natureza. Sua importância vai desde aspectos nutricionais até aplicações industriais. Dentre a imensa variedade de carboidratos estão os frutooligossacarídeos considerados prebióticos; açúcares invertidos, de importância industrial devido ao seu alto poder adoçante; dextrans, com diversas aplicações, mas cuja presença no caldo de cana afeta a produção de açúcar. Pesquisas e aplicações relacionadas a carboidratos requerem a obtenção de dados confiáveis sobre sua síntese e cinética de degradação. Um dos métodos de quantificação de carboidratos é por meio de um equipamento de cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) acoplado a um detector de índice de refração (IR). Objetivo: qualificar um equipamento de HPLC acoplado a um detector de índice de refração (IR) para a validação do método de quantificação de carboidratos. Metodologia: a qualificação HPLC-IR foi realizada de acordo com o Guia para a qualificação do equipamento - Anexo 1 da 2011. A precisão do fluxo da bomba, a precisão e linearidade do injetor manual, a precisão e estabilidade do temperatura do forno, bem como a linearidade e relação sinal/ruído no detector IR. Resultados: este trabalho demonstrou que o sistema HPLC-IR funciona consistentemente de acordo com as especificações do fabricante, garantindo assim o correto desempenho do equipamento em condições reais de operação. Conclusão: a qualificação satisfatória do instrumento analítico permitiu a validação do método de quantificação de carboidratos utilizando esta tecnologia.