Development and validation of a new rapid reversed-phase HPLC method for the simultaneous quantification of melittin and apamin in apitoxin

Desarrollo y validación de un nuevo método rápido de HPLC en fase reversa para la cuantificación simultánea de melitina y apamina en apitoxina

Context: High performance liquid chromatography (HPLC) is a high sensitivity and precision to api-toxin samples analysis. However, it has the disadvantage of incurring high financial, environmental and time costs. Aims: The aim of this study is to develop a shorter HPLC method for the quantification of apitoxin samples. Methods: The method was performed and validated on an RP-C18 column, mobile phases A (water and trifluoroacetic acid (TFA) 0.1%) and B (acetonitrile and TFA 0.1 %), gradient mode, flow rate 1.5 mL/min and 220 nm absorbance. Key results: The gradient elution 5% - 70% phase B over 20 minutes, after a 4-minute isocratic elution with 5% B at 25°C. Results showed a linear in the range between 0.084 and 0.84 mg/mL (R2=0.995) for melittin and between 0.02 and 0.20 mg/mL (R2=0.995) for apamin, accurate method (recovery rate 101.11 ±9.47 % and 113.57 ±15.06 % respectively). Precision: 10.37 and 9.33 for melittin and apamin respectively, and result of a selective method in its usual matrix. The LOD was 0.00178 and 0.00117 mg/mL, and LOQ was 0.00541 and 0.00353 mg/mL, for melittin and apamin, respectively. 

Contexto: La cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) es un método de alta sensibilidad y pre-cisión para el análisis de muestras de apitoxina. Sin embargo, tiene la desventaja de generar altos costos financieros, ambientales y de tiempo. Objetivos: El objetivo de este estudio es desarrollar un método de HPLC más corto para la cuantificación de muestras de apitoxina. Métodos: El método se realizó y validó en una columna RP-C18, fases móviles A (agua y ácido trifluoroacético (TFA) 0,1%) y B (acetoni-trilo y TFA 0,1%), modo gradiente, velocidad de flujo 1,5 mL/min y absorbancia A 220 nm. Resultados clave: La elución en gradiente 5% - 70% de la fase B durante 20 minutos, después de una elución isocrá-tica de 4 minutos con 5% de B a 25 °C. Los resultados mostraron una linealidad en el rango entre 0,084 y 0,84 mg/mL (R2=0,995) para melitina y entre 0,02 y 0,20 mg/mL (R2=0,995) para apamina, método pre-ciso (tasa de recuperación 101,11 ± 9,47 % y 113,57 ± 15,06 % respectivamente). Precisión: 10,37 y 9,33 para melitina y apamina respectivamente, y resultado de un método selectivo en su matriz habitual. El LOD fue 0,00178 y 0,00117 mg/mL, mientras que el LOQ fue 0,00541 y 0,00353 mg/mL, para melitina y apamina, respectivamente. 

Contexto: A cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) é uma análise de amostras de apitoxina de alta sensibilidade e precisão. No entanto, tem a desvantagem de incorrer em altos custos financeiros, ambientais e de tempo. Objetivos: O objetivo deste estudo é desenvolver um método de HPLC mais curto para quantificação de amostras de apitoxina. Métodos: O método foi realizado e validado em uma coluna RP-C18, fases móveis A (água e ácido trifluoroacético (TFA) 0,1%) e B (acetonitrila e TFA 0,1%), modo gradiente, vazão de 1,5 mL/min e absorbância de 220 nm. Principais resultados: A eluição do gradiente de 5% - 70% da fase B ao longo de 20 minutos, após uma eluição isocrática de 4 minutos com 5% de B a 25 °C. Os resultados mostraram uma linearidade no intervalo entre 0,084 e 0,84 mg/mL (R2=0,995) para melitina e entre 0,02 e 0,20 mg/mL (R2=0,995) para apamina, método preciso (taxa de recuperação de 101,11 ±9,47% e 113,57 ±15,06% respectivamente). Precisão: 10,37 e 9,33 para melitina e apamina respectivamente, e resultado de um método seletivo em sua matriz usual. O LOD foi de 0,00178 e 0,00117 mg/mL, e o LOQ foi de 0,00541 e 0,00353 mg/mL, para melitina e apamina, respectivamente.