DETECCIÓN DEL RNA DEL VIRUS DE LA FIEBRE AFTOSA MEDIANTE UNA SONDA PRODUCIDA POR PCR

En el desarrollo de un método de detección del virus de la fiebre aftosa (VFA) en animales portadores asintomáticos, se produjeron sondas complementarias al gen de la proteína de cápside VPl, consistentes en productos de amplificación por PCR (Reacción en cadena de la polimerasa) simétrico y asimétrico de un c-DNA que comprendía esta región. Las sondas fueron DNA de doble cadena (PCR simétrico) y cadenas sencillas (PCR asimétrico). Este último tipo de sonda, aunque no fue evaluada presentaría ventajas en afinidad y sencillez del proceso de hibridizacion, no necesitando ser desnaturalizada. Se compararon dos métodos de marcación de la sonda de doble cadena, uno usando iniciadores específicos, el otro usando iniciadores aleatorios. El segundo método fue más eficiente en la incorporación del nucleótido radioactivo. Por autorradiografíade las moléculas híbridas inmovilizadas sobre membranas de nylon o nitrocelulosa (dot blot) se logró una sensibilidad de 0.4 ng RNA viral no purificado. La especificidad del sistema fue adecuada cuando las membranas fueron lavadas a 68°C, pero no a 37°C.