Acumulación de la proteína de choque térmico, HSC70, en células MA104 después de la infección con rotavirus

Increase of heat shock cognate protein, HSC70, in MA104 cells following rotavirus infection

Antecedentes. La HSC70 actúa como coreceptor celular de los rotavirus durante la infección en células MA104, pero no se conocen los cambios en la expresión de esta proteína durante la infección del rotavirus.
Objetivo. Determinar si los niveles de acumulación de la proteína HSC70 en células MA104 cambian después de la infección con rotavirus.
Materiales y métodos. Se estudió la expresión de la proteína de estrés HSC70 mediante inmunofluorescencia, “Western blotting” y ELISA en células de la línea MA104 infectadas con tres cepas de rotavirus: Wa (humana), Rf (bovina), RRV (simio) durante un ciclo de replicación (0 hasta 16 h p.i.). Igualmente, se produjo un anticuerpo policlonal en conejo contra rotavirus que se utilizó para detectar los rotavirus.
Resultados La inmunofluorescencia en células infectadas con cada una de las tres cepas de rotavirus muestran una correlación directa entre el aumento de fluorescencia en el citoplasma con el aumento del antígeno viral. La fluorescencia en citoplasma es mayor 1.1. a dos veces en las células infectadas comparadas con las del control, mientras que, la fluorescencia en la membrana celular es semejante a aquella de las células no infectadas del control. La técnica de “western blotting” no permitió establecer diferencias entre los lisados de células MA104 infectadas y no infectadas, porque el aumento de la proteína no alcanza a ser detectado. Según los resultados de ELISA, la HSC70 aumenta en células MA104 después de la infección con RRV de 1.3 a dos veces después de ocho h p.i. Con Rf 1.3 y 2.5 veces después de diez h p.i. y Wa 1.7 a tres veces después de dos h p.i.
Conclusión. Los resultados sugieren que la HSC70 aumenta su expresión durante la infección con rotavirus y probablemente está implicada en los pasos del ciclo replicativo: la entrada, el empaquetamiento y la liberación de nuevas partículas virales.

Background. HSC70 acts as a cellular coreceptor for rotavirus particles during the infection of MA104 cells, but changes in the accumulation levels of this protein through the rotavirus infection cycle are unknown.
Objetive. To determine if the accumulation levels of HSC70 in MA104 cells change during the infection by rotavirus.
Materials and methods. Immunofluorescene microscopy, Western blotting an ELISA were used in order to determine HSC70 accumulation levels in MA104 cells after infection (0 up to 16 h p.i.) by rotavirus strains Wa (human), Rf (bovine) and RRV (simian). Additionally, a rabbit polyclonal serum against purified rotavirus particles was used for detecting rotavirus antigen in an immunoperoxidase assay.
Results. The immunofluorescence staining of cells infected with each of three rotavirus strains showed a direct correlation between the increase of fluorescence in the cytoplasm and the increase of the viral antigen. The intensity of the cytoplasm fluorescence was 1.1 to 2.0 times higher in infected cells than that observed in control cells. On the other hand, the intensity of the fluorescence in the cell membrane was similar to that of the non-infected control cells. The Western blotting assay did not allow to establish measurable differences between infected and non-infected MA104 cells, because the increase of the protein are below the detection limit. According to the results of ELISA, HSC70 level increases 1 to 3 times in MA104 cells after (8 h p.i.) the infection with strain RRV, whereas infection with strain RF produced an increase which ranged from 1.3 to 2.5 times after 10 h p.i. Infection by strain Wa was correlated with un increase of HSC70 level between 1.7 and 3.0 times after 2 h p.i.
Conclusions. The results suggest that the increase of HSC70 accumulation level possibly corresponds to an increased expression of its gene during the rotavirus infection and probably it is involved in rotavirus multiplication steps additional to those of entry and exit processes.